Javascript is tans in jou blaaier gedeaktiveer.Wanneer javascript gedeaktiveer is, sal sommige funksies van hierdie webwerf nie werk nie.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Departement van Wetenskap, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonië, Spanje * Hierdie skrywers het 'n paar insigte in hierdie werk Equal bydrae agtergrond: Hyaluronzuur (HA) is 'n natuurlik voorkomende polisakkaried wat gebruik word in die vervaardiging van dermale vullers vir estetiese doeleindes.Aangesien dit 'n halfleeftyd van etlike dae in menslike weefsel het, word HA-gebaseerde dermale vullers chemies aangepas om hul lewe in die liggaam te verleng.Die mees algemene modifikasie in kommersiële HA-gebaseerde vullers is die gebruik van 1,4-butaandioldiglisidieleter (BDDE) as 'n kruisbindingsmiddel om die HA-kettings te kruisbind.Residuele of ongereageerde BDDE word as nie-giftig beskou teen <2 dele per miljoen (dpm);daarom moet die oorblywende BDDE in die finale dermale vuller gekwantifiseer word om pasiëntveiligheid te verseker.Materiale en metodes: Hierdie studie beskryf die opsporing en karakterisering van 'n neweproduk van die kruisbindingsreaksie tussen BDDE en HA onder alkaliese toestande deur vloeistofchromatografie en massaspektrometrie (LC-MS) te kombineer.Resultate: Na verskillende ontledings is gevind dat die alkaliese toestande en hoë temperatuur wat gebruik word om die HA-BDDE hidrogel te ontsmet, die vorming van hierdie nuwe neweproduk, die "propileenglikol-agtige" verbinding, bevorder het.LC-MS analise het bevestig dat die neweproduk dieselfde monoisotopiese massa as BDDE het, 'n ander retensietyd (tR), en 'n ander UV absorpsie (λ=200 nm) modus.Anders as BDDE, is dit in LC-MS-analise waargeneem dat hierdie neweproduk onder dieselfde metingstoestande 'n hoër deteksietempo by 200 nm het.Gevolgtrekking: Hierdie resultate dui aan dat daar geen epoksied in die struktuur van hierdie nuwe verbinding is nie.Die bespreking is oop om die risiko van hierdie nuwe neweproduk wat gevind word in die vervaardiging van HA-BDDE hidrogel (HA-dermale vuller) vir kommersiële doeleindes te bepaal.Sleutelwoorde: hyaluronzuur, HA-dermale vuller, kruisgekoppelde hyaluronzuur, BDDE, LC-MS-analise, BDDE-byproduk.
Vullers gebaseer op hyaluronzuur (HA) is die algemeenste en gewildste dermale vullers wat vir kosmetiese doeleindes gebruik word.1 Hierdie dermale vuller is 'n hidrogel, gewoonlik saamgestel uit >95% water en 0,5-3% HA, wat hulle 'n jelagtige struktuur gee.2 HA is 'n polisakkaried en die hoofkomponent van die ekstrasellulêre matriks van vertebrate.Een van die bestanddele.Dit bestaan uit (1,4)-glukuronzuur-β (1,3)-N-asetielglukosamien (GlcNAc) herhalende disakkariedeenhede wat deur glikosidiese bindings verbind word.Hierdie disakkariedpatroon is dieselfde in alle organismes.In vergelyking met sommige proteïengebaseerde vullers (soos kollageen), maak hierdie eienskap HA 'n hoogs bioversoenbare molekule.Hierdie vullers kan aminosuurvolgorde-spesifisiteit vertoon wat deur die pasiënt se immuunstelsel herken kan word.
Wanneer dit as 'n dermale vuller gebruik word, is die hoofbeperking van HA die vinnige omset binne die weefsels as gevolg van die teenwoordigheid van 'n spesifieke familie van ensieme genaamd hyaluronidases.Tot dusver is verskeie chemiese modifikasies in die HA-struktuur beskryf om die halfleeftyd van HA in weefsels te verhoog.3 Die meeste van hierdie modifikasies poog om die toegang van hyaluronidase tot polisakkariedpolimere te verminder deur HA-kettings te kruis.Daarom, as gevolg van die vorming van brûe en die intermolekulêre kovalente bindings tussen die HA-struktuur en die kruisbindingsmiddel, produseer die verknoopte HA-hidrogel meer anti-ensiemafbraakprodukte as die natuurlike HA.4-6
Tot dusver sluit die chemiese kruisbindingsmiddels wat gebruik word om verknoopte HA te produseer, metakrilamied, 7-hidrasied, 8-karbodiimied, 9-diviniel-sulfon, 1,4-butaandiol-diglisidiel-eter (BDDE) en poli(etileenglikol)-diglisidiel-eter.10 ,11 BDDE is tans die mees gebruikte kruisbindingsmiddel.Alhoewel hierdie tipe hidrogels al vir dekades bewys is dat dit veilig is, is die kruisbindingsmiddels wat gebruik word, reaktiewe reagense wat sitotoksies en, in sommige gevalle, mutageen kan wees.12 Daarom moet hul oorblywende inhoud in die finale hidrogel hoog wees.BDDE word as veilig beskou wanneer die oorblywende konsentrasie minder as 2 dele per miljoen (dpm) is.4
Daar is verskeie metodes om lae-residu BDDE-konsentrasie, kruisbindingsgraad en substitusieposisie in HA hidrogels op te spoor, soos gaschromatografie, grootte-uitsluitingschromatografie tesame met massaspektrometrie (MS), kernmagnetiese resonansie (KMR) fluoressensiemetingsmetodes, en Diode-skikking gekoppelde hoë werkverrigting vloeistofchromatografie (HPLC).13-17 Hierdie studie beskryf die opsporing en karakterisering van 'n neweproduk in die finale kruisgebonde HA hidrogel wat deur die reaksie van BDDE en HA onder alkaliese toestande geproduseer word.HPLC en vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS-analise).Aangesien die toksisiteit van hierdie neweproduk van BDDE onbekend is, beveel ons aan dat die residu-kwantifisering daarvan op 'n soortgelyke wyse bepaal moet word as die metode wat gewoonlik op BDDE in die finale produk uitgevoer word.
Die verkryde natriumsout van HA (Shiseido Co., Bpk., Tokio, Japan) het 'n molekulêre gewig van ~1 368 000 Da (Laurent-metode) 18 en 'n intrinsieke viskositeit van 2,20 m3/kg.Vir die kruisbindingsreaksie is BDDE (≥95%) van Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, VSA) gekoop.Fosfaatgebufferde soutoplossing met pH 7.4 is van Sigma-Aldrich Company gekoop.Alle oplosmiddels, asetonitriel en water wat in die LC-MS-analise gebruik is, is van HPLC-graad kwaliteit aangekoop.Miersuur (98%) word as reagensgraad aangekoop.
Alle eksperimente is uitgevoer op 'n UPLC Acquity-stelsel (Waters, Milford, MA, VSA) en gekoppel aan 'n API 3000 drievoudige kwadrupool massaspektrometer toegerus met 'n elektrosproei-ionisasiebron (AB SCIEX, Framingham, MA, VSA).
Die sintese van kruisgebonde HA-hidrogels is begin deur 198 mg BDDE by 'n 10% (w/w) natriumhialuronaat (NaHA) oplossing in die teenwoordigheid van 1% alkali (natriumhidroksied, NaOH) by te voeg.Die finale BDDE-konsentrasie in die reaksiemengsel was 9.9 mg/ml (0.049 mM).Daarna is die reaksiemengsel deeglik gemeng en gehomogeniseer en toegelaat om vir 4 uur by 45°C voort te gaan.19 Die pH van die reaksie word op ~12 gehandhaaf.
Daarna is die reaksiemengsel met water gewas, en die finale HA-BDDE hidrogel is gefiltreer en verdun met PBS buffer om 'n HA konsentrasie van 10 tot 25 mg/ml te bereik, en 'n finale pH van 7.4.Ten einde die geproduseerde kruisgebonde HA-hidrogels te steriliseer, word al hierdie hidrogels geoutoklaveer (120°C vir 20 minute).Die gesuiwerde BDDE-HA hidrogel word by 4°C gestoor tot ontleding.
Om die BDDE teenwoordig in die verknoopte HA-produk te ontleed, is 'n 240 mg monster geweeg en in die middelste gat (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, VSA; volume 0,5 ml) ingebring en teen 10 000 rpm by kamertemperatuur gesentrifugeer 10 minute.'n Totaal van 20 µL aftrekvloeistof is versamel en ontleed.
Ten einde die BDDE-standaard (Sigma-Aldrich Co) onder alkaliese toestande (1%, 0.1% en 0.01% NaOH) te ontleed, indien aan die volgende voorwaardes voldoen word, is die vloeistofmonster 1:10, 1:100, of tot 1:1 000 000 Indien nodig, gebruik MilliQ gedeïoniseerde water vir ontleding.
Vir die uitgangsmateriale wat in die kruisbindingsreaksie gebruik is (HA 2%, H2O, 1% NaOH en 0.049 mM BDDE), is 1 ml van elke monster wat uit hierdie materiale voorberei is, met dieselfde ontledingstoestande ontleed.
Om die spesifisiteit van die pieke wat in die ioonkaart verskyn te bepaal, is 10 µL van 100 ppb BDDE standaardoplossing (Sigma-Aldrich Co) by die 20 µL monster gevoeg.In hierdie geval is die finale konsentrasie van die standaard in elke monster 37 ppb.
Berei eers 'n BDDE voorraadoplossing met 'n konsentrasie van 11 000 mg/L (11 000 dpm) voor deur 10 μL standaard BDDE (Sigma-Aldrich Co) met 990 μL MilliQ water (digtheid 1,1 g/ml) te verdun.Gebruik hierdie oplossing om 'n 110 µg/L (110 ppb) BDDE-oplossing as 'n intermediêre standaardverdunning voor te berei.Gebruik dan die intermediêre BDDE standaard verdunningsmiddel (110 ppb) om die standaard kurwe voor te berei deur die intermediêre verdunningsmiddel verskeie kere te verdun om die verlangde konsentrasie van 75, 50, 25, 10 en 1 ppb te bereik.Soos getoon in Figuur 1, word gevind dat die BDDE-standaardkromme van 1.1 tot 110 ppb goeie lineariteit het (R2>0.99).Die standaardkurwe is in vier onafhanklike eksperimente herhaal.
Figuur 1 BDDE standaard kalibrasie kurwe verkry deur LC-MS analise, waarin 'n goeie korrelasie waargeneem word (R2>0.99).
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie.
Ten einde die BDDE-standaarde wat in die kruisgebonde HA en die BDDE-standaarde in die basisoplossing teenwoordig is te identifiseer en te kwantifiseer, is LC-MS-analise gebruik.
Die chromatografiese skeiding is bereik op 'n LUNA 2.5 µm C18(2)-HST kolom (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, VSA) en gehou by kamertemperatuur (25°C) tydens die analise.Die mobiele fase bestaan uit asetonitriel (oplosmiddel A) en water (oplosmiddel B) wat 0,1% mieresuur bevat.Die mobiele fase word deur gradiënt-eluering geëlueer.Die gradiënt is soos volg: 0 minute, 2% A;1 minuut, 2% A;6 minute, 98% A;7 minute, 98% A;7,1 minute, 2% A;10 minute, 2% A. Die looptyd is 10 minute en die inspuitvolume is 20 µL.Die retensietyd van BDDE is ongeveer 3,48 minute (wat wissel van 3,43 tot 4,14 minute gebaseer op eksperimente).Die mobiele fase is gepomp teen 'n vloeitempo van 0.25 mL/min vir LC-MS analise.
Vir BDDE-analise en kwantifisering deur MS word die UPLC-stelsel (Waters) gekombineer met 'n API 3000 drievoudige kwadrupoolmassaspektrometer (AB SCIEX) toegerus met 'n elektrosproei-ionisasiebron, en die analise word in positiewe ioonmodus (ESI+) uitgevoer.
Volgens die ioonfragmentanalise wat op BDDE uitgevoer is, is die fragment met die hoogste intensiteit bepaal as die fragment wat ooreenstem met 129.1 Da (Figuur 6).Daarom, in die multi-ioon moniteringsmodus (MIM) vir kwantifisering, is die massa-omskakeling (massa-tot-lading verhouding [m/z]) van BDDE 203.3/129.1 Da.Dit gebruik ook volledige skandering (FS) modus en produk ioon skandering (PIS) modus vir LC-MS analise.
Ten einde die spesifisiteit van die metode te verifieer, is 'n blanko monster (aanvanklike mobiele fase) ontleed.Geen sein is in die blanko monster met 'n massa-omsetting van 203.3/129.1 Da opgespoor nie.Wat die herhaalbaarheid van die eksperiment betref, is 10 standaard inspuitings van 55 ppb (in die middel van die kalibrasiekurwe) ontleed, wat gelei het tot 'n residuele standaardafwyking (RSD) <5% (data nie getoon nie).
Die oorblywende BDDE-inhoud is gekwantifiseer in agt verskillende outoklaveerde BDDE-kruisgebonde HA-hidrogels, wat ooreenstem met vier onafhanklike eksperimente.Soos beskryf in die "Materiale en Metodes" afdeling, word die kwantifisering geëvalueer deur die gemiddelde waarde van die regressiekromme van die BDDE standaard verdunning, wat ooreenstem met die unieke piek waargeneem by die BDDE massa oorgang van 203.3/129.1 Da, met 'n retensie tyd van 3.43 tot 4.14 minute Wag nie.Figuur 2 toon 'n voorbeeldchromatogram van die 10 ppb BDDE verwysingstandaard.Tabel 1 som die oorblywende BDDE-inhoud van agt verskillende hidrogels op.Die waardereeks is 1 tot 2,46 ppb.Daarom is die oorblywende BDDE-konsentrasie in die monster aanvaarbaar vir menslike gebruik (<2 dpm).
Figuur 2 Ioonchromatogram van 10 ppb BDDE verwysingstandaard (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) oorgang verkry deur LC-MS analise van 203.30/129.10 Da (in positiewe MRM modus).
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering;MS, massa;m/z, massa-tot-lading verhouding.
Let wel: Monsters 1-8 is geoutoklaveerde BDDE-kruisgebonde HA-hidrogels.Die oorblywende hoeveelheid BDDE in die hidrogel en die piek van BDDE-retensietyd word ook gerapporteer.Laastens word die bestaan van nuwe pieke met verskillende retensietye ook gerapporteer.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;HA, hyaluronzuur;MRM, meervoudige reaksie monitering;tR, retensietyd;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;RRT, relatiewe retensietyd.
Verbasend genoeg het die ontleding van die LC-MS ioonchromatogram getoon dat gegrond op al die geoutoklaveerde kruisgekoppelde HA hidrogelmonsters wat ontleed is, daar 'n ekstra piek by die korter retensietyd van 2.73 tot 3.29 minute was.Byvoorbeeld, Figuur 3 toon die ioonchromatogram van 'n kruisgekoppelde HA-monster, waar 'n bykomende piek by 'n ander retensietyd van ongeveer 2.71 minute verskyn.Die waargenome relatiewe retensietyd (RRT) tussen die nuut waargenome piek en die piek van BDDE is gevind as 0.79 (Tabel 1).Aangesien ons weet dat die nuut waargenome piek minder behou word in die C18-kolom wat in die LC-MS-analise gebruik word, kan die nuwe piek ooreenstem met 'n meer polêre verbinding as BDDE.
Figuur 3 Ioonchromatogram van kruisgekoppelde HA hidrogelmonster verkry deur LC-MS (MRM massa-omskakeling 203.3/129.0 Da).
Afkortings: HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering;RRT, relatiewe retensietyd;tR, retensietyd.
Ten einde die moontlikheid uit te sluit dat die nuwe pieke wat waargeneem is, besoedeling kan wees wat oorspronklik in die grondstowwe wat gebruik is, aanwesig is, is hierdie grondstowwe ook met dieselfde LC-MS analise metode ontleed.Die beginmateriaal wat ontleed is, sluit in water, 2% NaHA in water, 1% NaOH in water en BDDE by dieselfde konsentrasie wat in die kruisbindingsreaksie gebruik is.Die ioonchromatogram van die beginmateriaal wat gebruik is, het geen verbinding of piek getoon nie, en die retensietyd daarvan stem ooreen met die nuwe piek wat waargeneem is.Hierdie feit verwerp die idee dat nie net die beginmateriaal enige verbindings of stowwe kan bevat wat met die ontledingsprosedure kan inmeng nie, maar daar is geen teken van moontlike kruiskontaminasie met ander laboratoriumprodukte nie.Die konsentrasiewaardes verkry na LC-MS-analise van BDDE en nuwe pieke word in Tabel 2 (monsters 1-4) en die ioonchromatogram in Figuur 4 getoon.
Let wel: Monsters 1-4 stem ooreen met die grondstowwe wat gebruik word om geoutoklaveerde BDDE-kruisgebonde HA-hidrogels te vervaardig.Hierdie monsters is nie geoutoklaveer nie.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering.
Figuur 4 stem ooreen met die LC-MS-chromatogram van 'n monster van die grondstof wat in die kruisbindingsreaksie van HA en BDDE gebruik word.
Let wel: Al hierdie word gemeet teen dieselfde konsentrasie en verhouding wat gebruik word om die kruisbindingsreaksie uit te voer.Die getalle vir die grondstowwe wat deur die chromatogram ontleed word, stem ooreen met: (1) water, (2) 2% HA waterige oplossing, (3) 1% NaOH waterige oplossing.LC-MS-analise word uitgevoer vir massa-omskakeling van 203.30/129.10 Da (in positiewe MRM-modus).
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering.
Die toestande wat tot die vorming van nuwe pieke gelei het, is bestudeer.Ten einde te bestudeer hoe die reaksietoestande wat gebruik word om die verknoopte HA-hidrogel te produseer, die reaktiwiteit van die BDDE-kruisbindingsmiddel beïnvloed, wat lei tot die vorming van nuwe pieke (moontlike neweprodukte), is verskillende metings uitgevoer.In hierdie bepalings het ons die finale BDDE-kruisbinder bestudeer en ontleed, wat behandel is met verskillende konsentrasies NaOH (0%, 1%, 0.1% en 0.01%) in 'n waterige medium, gevolg deur of sonder outoklavering.Die bakterieë prosedure om dieselfde toestande te simuleer is dieselfde as die metode wat gebruik word om die kruisgebonde HA hidrogel te produseer.Soos beskryf in die "Materiale en Metodes" afdeling, is die massa-oorgang van die monster deur LC-MS na 203.30/129.10 Da ontleed.Die BDDE en die konsentrasie van die nuwe piek word bereken, en die resultate word in Tabel 3 getoon. Geen nuwe pieke is opgespoor in die monsters wat nie geoutoklaveer is nie, ongeag die teenwoordigheid van NaOH in die oplossing (monsters 1-4, Tabel 3).Vir outoklaveerde monsters word nuwe pieke slegs in die teenwoordigheid van NaOH in die oplossing opgespoor, en die vorming van die piek blyk af te hang van die NaOH-konsentrasie in die oplossing (monsters 5-8, Tabel 3) (RRT = 0.79).Figuur 5 toon 'n voorbeeld van 'n ioonchromatogram, wat twee geoutoklaveerde monsters in die teenwoordigheid of afwesigheid van NAOH toon.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering.
Let wel: Die boonste chromatogram: Die monster is behandel met 0.1% NaOH waterige oplossing en geoutoklaveer (120°C vir 20 minute).Onderste chromatogram: Die monster is nie met NaOH behandel nie, maar onder dieselfde toestande geoutoklaveer.Die massa-omskakeling van 203.30/129.10 Da (in positiewe MRM-modus) is deur LC-MS ontleed.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering.
In alle outoklaveerde monsters, met of sonder NaOH, was die BDDE-konsentrasie aansienlik verminder (tot 16.6 keer) (monsters 5-8, Tabel 2).Die afname in BDDE-konsentrasie kan wees as gevolg van die feit dat water by hoë temperature as 'n basis (nukleofiel) kan optree om die epoksiedring van BDDE oop te maak om 'n 1,2-diolverbinding te vorm.Die monoisotopiese kwaliteit van hierdie verbinding verskil van dié van BDDE en sal dus nie beïnvloed word nie.LC-MS het 'n massaverskuiwing van 203.30/129.10 Da opgespoor.
Laastens toon hierdie eksperimente dat die generering van nuwe pieke afhang van die teenwoordigheid van BDDE, NAOH en die outoklaafproses, maar niks met HA te doen het nie.
Die nuwe piek wat gevind is teen 'n retensietyd van ongeveer 2.71 minute, is toe gekenmerk deur LC-MS.Vir hierdie doel is BDDE (9.9 mg/ml) in 'n 1% NaOH waterige oplossing geïnkubeer en geoutoklaveer.In Tabel 4 word die kenmerke van die nuwe piek vergelyk met die bekende BDDE verwysingspiek (retensietyd ongeveer 3.47 minute).Gebaseer op die ioonfragmentasie-analise van die twee pieke, kan die gevolgtrekking gemaak word dat die piek met 'n retensietyd van 2.72 minute dieselfde fragmente as die BDDE-piek toon, maar met verskillende intensiteite (Figuur 6).Vir die piek wat ooreenstem met die retensietyd (PIS) van 2.72 minute, is 'n meer intense piek waargeneem na fragmentasie by 'n massa van 147 Da.By die BDDE-konsentrasie (9.9 mg/mL) wat in hierdie bepaling gebruik is, is verskillende absorpsiemodusse (UV, λ=200 nm) in die ultravioletspektrum ook waargeneem na chromatografiese skeiding (Figuur 7).Die piek met 'n retensietyd van 2.71 minute is steeds sigbaar by 200 nm, terwyl die BDDE-piek nie onder dieselfde toestande in die chromatogram waargeneem kan word nie.
Tabel 4 Karakteriseringsresultate van die nuwe piek met 'n retensietyd van ongeveer 2.71 minute en die BDDE-piek met 'n retensietyd van 3.47 minute
Let wel: Om hierdie resultate te verkry, is LC-MS en HPLC ontledings (MRM en PIS) op die twee pieke uitgevoer.Vir HPLC-analise word UV-opsporing met 'n golflengte van 200 nm gebruik.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;HPLC, hoë werkverrigting vloeistofchromatografie;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering;m/z, massa-tot-lading verhouding;PIS, produk Ioon skandering;ultraviolet lig, ultraviolet lig.
Let wel: Die massafragmente word verkry deur LC-MS-analise (PIS).Topchromatogram: massaspektrum van BDDE-standaardmonsterfragmente.Onderste chromatogram: Die massaspektrum van die nuwe piek wat opgespoor is (RRT geassosieer met die BDDE piek is 0.79).BDDE is in 1% NaOH-oplossing verwerk en geoutoklaveer.
Afkortings: BDDE, 1,4-butaandiol diglisidiel eter;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspektrometrie;MRM, meervoudige reaksie monitering;PIS, produk-ioonskandering;RRT, relatiewe retensietyd.
Figuur 7 Ioonchromatogram van die 203.30 Da-voorloperioon, en (A) die nuwe piek met 'n retensietyd van 2.71 minute en (B) die UV-opsporing van die BDDE-verwysingstandaardpiek by 3.46 minute by 200 nm.
In al die verknoopte HA hidrogels wat geproduseer is, is waargeneem dat die oorblywende BDDE konsentrasie na LC-MS kwantifisering <2 dpm was, maar 'n nuwe onbekende piek het in die analise verskyn.Hierdie nuwe piek pas nie by die BDDE-standaardproduk nie.Die BDDE-standaardproduk het ook dieselfde kwaliteit-omskakeling (MRM-omskakeling 203.30/129.10 Da)-analise in die positiewe MRM-modus ondergaan.Oor die algemeen word ander analitiese metodes soos chromatografie as limiettoetse gebruik om BDDE in hidrogels op te spoor, maar die maksimum deteksielimiet (LOD) is effens laer as 2 dpm.Aan die ander kant, tot dusver, is KMR en MS gebruik om die graad van kruisbinding en/of modifikasie van HA in die suikereenheidfragmente van kruisgekoppelde HA-produkte te karakteriseer.Die doel van hierdie tegnieke was nog nooit om oorblywende BDDE-opsporing te kwantifiseer by sulke lae konsentrasies as wat ons in hierdie artikel beskryf nie (LOD van ons LC-MS-metode = 10 ppb).
Postyd: Sep-01-2021